金黄色葡萄球菌
Staphylococcus Aureus
1 范围
本规范规定了化妆品中金黄金色葡萄球菌的检验方法。
本规范适用于化妆品中金黄色葡萄球菌的检验。
2 定义
本规范采用下列定义
金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）为革兰氏阳性球菌，呈葡萄状排列，无芽胞， 无荚膜，能分解甘露醇，血浆凝固酶阳性。
该菌是葡萄球菌中对人类致病力最强的一种，能引起人体局部化脓性病灶，严重时可导致败血症。
3 仪器和设备
3.1 显微镜。
3.2 恒温培养箱：36℃±1℃。
3.3 离心机。
3.4 灭菌吸管，1mL、10mL。
3.5 灭菌试管：15×150mm。
3.6 载玻片。
3.7 酒精灯。
4 培养基和试剂
4.1 SCDLP 液体培养基
见总则中3.2。
4.2 7.5％的氯化钠肉汤
成分：蛋白胨 10g
牛肉膏 3g
氯化钠 75g
蒸馏水加至 1000mL
制法：将上述成分加热溶解，调pH 为7.4，分装，103.43kPa（121℃ 15 lb）15min 高压灭菌。
4.3 Baird Parker 平板
成分：胰蛋白胨 10g
牛肉膏 5g
酵母浸膏 1g
丙酮酸钠 10g
甘氨酸 12g
氯化锂（LiCl·6H2O） 5g
琼脂 20g
蒸馏水 950mL
pH7.0±0.2
增菌剂的配制：30％卵黄盐水50mL 与除菌过滤的1％亚碲酸钾溶液10mL 混合，保存于冰箱内。
制法：将各成分加到蒸馏水中，加热煮沸完全溶解，冷至25℃±1℃校正pH。分装每瓶95mL，103.43kPa（121℃ 15 lb）高压灭菌15min。临用时加热溶化琼脂，每95mL 加入预热至50℃左右的卵黄亚碲酸钾增菌剂5mL，摇匀后倾注平板。培养基应是致密不透明的。使用前在冰箱贮存不得超过48h±2h。
4.4 血琼脂培养基
成分：营养琼脂 100mL
脱纤维羊血（或兔血） 10mL
制法：将营养琼脂加热融化，待冷至50℃左右无菌操作加入脱纤维羊血，摇匀，制成平板，置冰箱内备用。
4.5 甘露醇发酵培养基
成分：蛋白胨 10g
氯化钠 5g
甘露醇 10g
牛肉膏 5g
0.2％麝香草酚蓝溶液 12mL
蒸馏水 1000mL
制法：将蛋白胨、氯化钠、牛肉膏加到蒸馏水中，加热溶解，调pH7.4，加入甘露醇和指示剂，混匀后分装试管中，68.95kPa（115℃ 10 lb）20min 灭菌备用。
4.6 兔（人）血浆制备
取3.8％柠檬酸钠溶液，103.43kPa（121℃ 15 lb）30min 高压灭菌，1 份加兔（人）全血4 份，混匀静置；2000rpm～3000rpm 离心3min～5min。血球下沉，取上面血浆。
5 操作步骤
5.1 增菌：取1：10 稀释的样品接种到90mL SCDLP 液体培养基中，置36℃±1℃培养箱，培养24h±2h。
注：如无此培养基也可用7.5％氯化钠肉汤。
5.2 分离：自上述增菌培养液中，取1～2 接种环，划线接种在Baird Parker 氏培养基，如无此培养基也可划线接种到血琼脂平板，置36℃±1℃培养24h～48h。在血琼脂平板上菌落呈金黄色，大而突起，圆形，不透明，表面光滑，周围有溶血圈。在Baird Parker 氏培养基上为圆形，光滑，凸起，湿润，直径为2mm～3mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊带，在其外层有一透明带。用接种针接触菌落似有奶油树胶的软度。偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落，但无混浊带及透明带。挑取单个菌落分纯在血琼脂平板上，置36℃±1℃培养24h±2h。
5.3 染色镜检：挑取分纯菌落，涂片，进行革兰氏染色，镜检。金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性菌，排列成葡萄状，无芽胞，无夹膜，致病性葡萄球菌，菌体较小，直径约为0.5μm～1μm。
5.4 甘露醇发酵试验：取上述分纯菌落接种到甘露醇发酵培养基中，在培养基液面上加入2mm～3mm 的灭菌液体石蜡，置36℃±1℃培养24h±2h，金黄色葡萄球菌应能发酵甘露醇产酸。

5.5 血浆凝固酶试验：吸取1:4 新鲜血浆0.5mL，放入灭菌小试管中，加入待检菌24h±2h肉汤培养物0.5mL。混匀，放36℃±1℃恒温箱或恒温水浴中，每半小时观察一次，6h 之内如呈现凝块即为阳性。同时以已知血浆凝固酶阳性和阴性菌株肉汤培养物及肉汤培养基各0.5mL，分别加入灭菌1:4 血浆0.5mL，混匀，作为对照。
6 检验结果报告
凡在上述选择平板上有可疑菌落生长，经染色镜检，证明为革兰氏阳性葡萄球菌，并能发酵甘露醇产酸，血浆凝固酶试验阳性者，可报告被检样品检出金黄色葡萄球菌。